Todo mundo sabe que existem muitos laboratórios, então quantas pessoas conhecem os laboratórios de PCR? E quais são os requisitos básicos para projetar laboratórios de PCR? Depois haverá VOLAB Xiaobian para discutir com todos ~
1, layout do laboratório de PCR
O laboratório de testes de amplificação por PCR é, em princípio, dividido em quatro áreas de trabalho distintas: área de armazenamento e preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de preparação e amplificação da mistura de reação de amplificação e área de análise de produtos de amplificação. Para evitar contaminação-cruzada, a entrada em cada área de trabalho deve seguir estritamente uma única direção, ou seja, apenas a partir da área de armazenamento e preparação de reagentes → área de preparação de amostras → área de preparação e amplificação da mistura de reação de amplificação → área de análise do produto de amplificação. A transferência de reagentes e amostras entre cada zona experimental deve ser realizada através de uma janela de transferência.
2. Projeto de sistema de ventilação de ar condicionado de laboratório e controle de pressão
Os laboratórios de PCR não possuem requisitos rígidos de purificação, mas para evitar a possibilidade de contaminação-cruzada entre as diversas áreas experimentais, é aconselhável utilizar um sistema de distribuição de ar-de fluxo total. Ao mesmo tempo, a proporção de envio e exaustão deve ser rigorosamente controlada para garantir os requisitos de pressão de cada área experimental.
2.1, área de preparação de amostras
As principais operações nesta área são a preservação de amostras, a extração de ácidos nucleicos (RNA, DNA), o armazenamento e sua adição em tubos de reação de amplificação e a determinação da síntese de DNA. Os requisitos de gradiente de pressão nesta área são: pressão positiva relativa à área adjacente para evitar contaminação por aerossol da área adjacente para esta área. Além disso, devido à possibilidade de contaminação-induzida por aerossol durante a operação de carregamento, deve-se evitar caminhadas desnecessárias na área.
2.2. Área de armazenamento e preparação de reagentes
As principais operações nesta área experimental são a preparação de reagentes de armazenamento, a dispensação de reagentes e a preparação das principais misturas reacionais. Os reagentes e materiais utilizados para preparação de amostras devem ser enviados diretamente para esta área e não devem passar por outras áreas. As matérias-primas dos reagentes devem ser armazenadas nesta área e preparadas na área nos reagentes de armazenamento necessários. Não existem requisitos rigorosos para o controle da pressão do ar.
2.3, área de análise de produto de amplificação
A principal operação nesta área é a determinação de fragmentos amplificados. Esta área é a principal fonte de contaminação do produto amplificado. Portanto, os requisitos de gradiente de pressão para esta área são: Pressão negativa relativa à área adjacente para evitar a difusão de produtos amplificados da área para outras áreas.
2.4, preparação da mistura de reação de amplificação e zona de amplificação
A principal operação nesta área é a amplificação do DNA. Além disso, a adição do modelo de DNA preparado (da área de preparação de amostras) e da mistura de reação principal (da área de armazenamento e preparação de reagentes) para preparar uma mistura de reação, etc., também pode ser realizada nesta área. Os requisitos de gradiente de pressão nesta área são: pressão negativa em relação à área adjacente para evitar vazamento de aerossol da área. Para evitar a poluição causada pelos aerossóis, as caminhadas desnecessárias na área devem ser minimizadas. Operações individuais, como amostragem, devem ser realizadas na bancada limpa.
3.1. Divisão estrita da área de trabalho
(1) A configuração de cada área experimental é razoável;
(2) Cada área experimental deve ter marcas óbvias (como números de casas ou diferentes cores de fundo, etc.) para evitar confusão entre itens de equipamento e reagentes em diferentes áreas experimentais.
3.2, configurações de sistema razoáveis
(1) Configuração razoável do sistema de ventilação-de ar condicionado, tente usar o sistema de-ar de envio-completo;
(2) O controle estrito da pressão do fluxo de ar garante diferentes requisitos de pressão em diferentes áreas experimentais.
3.3, a operação padrão
(1) Os técnicos do laboratório de inspeção de amplificação deverão realizar treinamento-no-trabalho e só poderão realizar testes clínicos de amplificação gênica após aprovação no treinamento;
(2) Durante a operação experimental, o operador deve usar luvas e substituí-las frequentemente. Além disso, o uso de toucas descartáveis durante a operação também é uma medida eficaz para evitar contaminações;
(3) O trabalho de limpeza é oportuno e correto. Após o término do experimento, a área deve ser limpa imediatamente. Além dos líquidos desinfetantes convencionais para desinfecção de superfícies ou para irradiação e desinfecção de lâmpadas ultravioleta, alguns equipamentos experimentais também deverão ser submetidos à esterilização de alta pressão.
3.4, gestão rigorosa
(1) Controlar rigorosamente o pessoal que entra e sai do laboratório. Pessoas não relacionadas ao experimento não deverão entrar ou sair do laboratório à vontade e, se necessário, deverão estabelecer passagens e portas independentes de e para toda a área experimental.
(2) Minimizar caminhadas desnecessárias na área experimental para reduzir a possibilidade de contaminação-cruzada.
(3) A área de análise do produto amplificado é a fonte mais importante de contaminação do produto amplificado. A solução residual não pode ser descartada no laboratório. Deve ser embebido na solução desinfetante e posteriormente descartado em local afastado do laboratório. As pontas utilizadas são descartáveis. Os materiais também devem ser desinfetados e esterilizados e depois tratados uniformemente, como incineração;
(4) A área de análise de produtos de amplificação pode utilizar certas mutações genéticas e substâncias tóxicas, e atenção especial deve ser dada à proteção da segurança do experimentador.
3.5. Instalações laboratoriais completas
Instalações completas de apoio laboratorial são condições necessárias para garantir o trabalho experimental. Os equipamentos e instrumentos correspondentes deverão ser equipados de acordo com os diferentes conteúdos experimentais de cada laboratório, como bancadas ultra-limpas, centrífugas e alimentadores de amostras.